昆明好的白癜风医院 http://baidianfeng.39.net/a_xcyy/160207/4769963.html马舒玉1,2张慧敏2李静静1,2谈诚1,2王志萍3
1徐州医科大学江苏省麻醉学重点实验室，江苏省麻醉与镇痛应用技术重点实验室；2医院麻醉科；3医院麻醉科
国际麻醉学与复苏杂志,,42(06):-.
DOI：10./cma.j.cn--
基金项目
江苏省卫生健康委科研项目（K）
ORIGINALARTICLES
本研究通过建立小鼠睡眠剥夺（SD）模型，探讨维生素D（VD）对SD小鼠认知功能的影响及其作用机制。
1材料与方法
将40只C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为4组（每组10只）：正常对照组（Ctrl组）、SD组、SD+VD组（VD组）、SD+VD+3MA组（3MA组）。Ctrl组不做任何处理，SD组、VD组、3MA组小鼠采用多平台水环境法进行72h的SD；VD组、3MA组腹腔注射1,25?二羟维生素D3［25（OH）2D3］1.5μg/kg，连续7d；3MA组腹腔注射自噬抑制剂3MA2mg/kg，连续7d；Ctrl组与SD组腹腔注射等量的生理盐水。造模结束后用Morris水迷宫检测小鼠学习、记忆能力，行为学测试完毕后随即处死取材，采用ELISA试剂盒检测小鼠血清中25羟基维生素D3（25HVD3）的含量以及海马组织中β?淀粉样蛋白（Aβ）、TNF?α、IL?1β及IL?6的含量，Westernblot法检测小鼠海马组织中自噬关键分子酵母Atg6同系物（Beclin1）和微管相关蛋白1轻链3B亚基（LC3B）的蛋白水平；免疫荧光染色法标记LC3B。
2结果
2.1 Morris水迷宫测试结果
4组小鼠空间探索轨迹见图1。4组小鼠SD前的平均逃避潜伏期差异无统计学意义（P0.05）。SD后，与Ctrl组比较，SD组、VD组与3MA组逃避潜伏期明显延长，穿越平台次数及目标象限停留时间减少（P0.05）；与SD组比较，VD组逃避潜伏期明显缩短，穿越平台次数及目标象限停留时间增加（P0.05）；与VD组比较，3MA组逃避潜伏期均明显延长，穿越平台次数及目标象限停留时间减少（P0.05）。而SD组与3MA组逃避潜伏期、穿越平台次数和目标象限停留时间比较差异均无统计学意义（P0.05）。见图2。
2.2 ELISA检测结果
与Ctrl组比较，SD组、VD组和3MA组血清中25HVD3含量均减少（P0.05）；与SD组比较，VD组和3MA组血清中25HVD3含量增加（P0.05）；VD组与3MA组血清中25HVD3含量比较差异无统计学意义（P0.05）。
与Ctrl组比较，SD组、VD组和3MA组海马组织中Aβ、TNF?α、IL?1β及IL?6含量均增加（P0.05）；与SD组比较，VD组和3MA组海马组织中Aβ、TNF?α、IL?1β及IL?6含量均减少（P0.05）；与VD组比较，3MA组海马组织中Aβ、TNF?α、IL?1β及IL?6含量均增加（P0.05）。见图3。
2.3 Westernblot检测结果
与Ctrl组比较，SD组、VD组和3MA组海马组织中Beclin1和LC3B的蛋白水平均升高（P0.05）。与VD组比较，SD组和3MA组海马组织中Beclin1和LC3B的蛋白水平降低（P0.05）。SD组与3MA组Beclin1和LC3B蛋白水平比较差异无统计学意义（P0.05）。见图4。
2.4 免疫荧光检测结果
与Ctrl组比较，SD组、VD组和3MA组绿色荧光表达均明显增强（提示LC3B表达均增加）。与SD组比较，VD组的绿色荧光表达更强。SD组与3MA组绿色荧光表达无明显区别。见图5。
3讨论
本实验采用改良多平台水环境法构建小鼠SD模型，用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力。结果显示，与Ctrl组比较，其余3组逃避潜伏期明显延长，穿越平台次数和目标象限停留时间减少，海马组织中Aβ含量增加，提示造模成功，证实SD小鼠存在认知功能障碍，与上述文献结果一致。
本研究建立小鼠SD模型，探讨VD对SD小鼠认知功能的影响及其潜在机制。结果表明，SD小鼠血清中25HVD3含量明显减少，证实了SD可导致小鼠体内VD含量下降。另外，与SD组比较，VD组逃避潜伏期明显缩短，穿越平台次数和目标象限停留时间增加，海马组织中Aβ减少，表明补充VD能改善SD介导的小鼠认知功能障碍。
本研究发现，与Ctrl组比较，SD组、VD组和3MA组海马组织中Beclin1和LC3B蛋白水平均增加，绿色荧光表达增强，与上述文献提及一致，表明SD可引起小鼠海马区自噬活动增强；另一方面，与SD组比较，VD组海马组织中Beclin1和LC3B蛋白水平增多，绿色荧光表达更强，而使用自噬抑制剂3MA后，海马组织中Beclin1和LC3B蛋白水平降低，绿色荧光表达下降，结果均提示VD通过诱导自噬增强改善SD小鼠的认知功能。
本研究通过ELISA法检测海马组织中IL?6、TNF?α和IL?1β的含量，结果显示：SD组、3MA组与Ctrl组比较，IL?6、TNF?α及IL?1β含量均增加；与SD组、3MA组比较，VD组中IL?6、TNF?α及IL?1β含量减少。表明中枢神经炎症反应参与了SD介导的学习记忆损伤的过程，VD可调节炎症因子的表达，减轻神经炎症反应，从而改善SD小鼠的认知功能。
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